孔板下室一般加入600μl含20S的培养基。取细胞悬液100μl加入Transwell小室。特别注意的是，下层培养液和小室间常会有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了，在种板的时候要特别留心，一旦出现气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板。
在下室（即24孔板底部）加入600-800ul含10%血清的培养基，上室加入100-150ul细胞悬液，继续在孵箱培养24小时。用镊子小心取出chamber，吸干上室液体，移到预先加入约800ul甲醇的孔中，室温固定30分钟。取出chamber，吸干上室固定液，移到预先加入约800ulGiemsa染液的孔中，室温染色15-30分钟。
0×PBS（pH0）：Na2HPO4·12H2O（MW354）87gKH2PO4（MW1309）0.2gNaCl（MW544）0gKCl（MW755）0.2g去离子水至100ml高压灭菌后，室温保存。使用液为1×PBS（用无菌水进行1：9稀释）。
拿出24孔板加600ml的含有刺激因子的培养基。小室上还未干的明胶甩掉，加细胞放入24孔板里。放入细胞培养箱培养4-6小室。拿出小室甩掉里边的培养基。小心擦尽小室里边的细胞（不能碰外边）。将小室放入装有600ml结晶紫的24孔板染色1小时。移到空的24孔板后即可在显微镜下观察了。
Transwell 培养板上室加入100μl 细胞悬液（ 5 ×104 个） 并加入无血清培养基200 ul 。Transwell 培养板下室加入500μl 趋化因子，37℃，5 %CO2 培养24 h。用湿棉签轻轻擦去Matrigel 凝胶和聚碳酯膜上表面的细胞。小心取出上室，用线拴住，并做好标记，用冰预冷的甲醇固定30 min。
原理： 将Transwell小室放入培养板中，小室内称为上室，培养板内成为下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。
transwell拍照一般先用4倍镜（物镜）排看总体情况，再用10倍镜（物镜）拍。transwell拍照一般会先排个物镜4倍的观察整体情况，然后会按米字每个transwell排8个十倍物镜的照片。
将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
当细胞膜的通透性发生改变时，一些正常情况下不能透过细胞膜的外部物质进入细胞的量增多，正常细胞内的有些物质也易于释放到细胞外，检测细胞通透性变化的方法也就是基于这样的原理而设计的。
实验步骤：消化细胞，制备无血清细胞悬浮液，计数，加入细胞悬液100ul，接种细胞105/孔。24孔板（下室）加入600ul含10%胎牛血清培养基，将小室置于24孔板中，上室加100ul无血清培养基悬浮的细胞。37℃培养一段时间（24h、36h、48h，若48小时后仅转移零星细胞，不建议做转移实验。
实验前将膜取出，放入装有PBS的培养皿中漂洗一遍，再用饥饿培养基洗一遍，吸去培养基后加入新的饥饿培养基，放入37度培养箱中。 处理细胞 将细胞消化，调浓度1×105个/ml，细胞迁移装置下层加入166μl含有刺激因子的饥饿培养基。小心铺好膜（粗面朝下），装好塑料垫，固定上层装置。
上室种肿瘤细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑，但与肿瘤细胞迁移实验不同的是， 聚碳酸酯膜上室侧铺上一层基质胶 ，用以模仿体内细胞外基质，细胞欲进入下室，先要 分泌基质金属蛋白酶（ MMPs ）将基质胶降解 ，方可通过聚碳酸酯膜。
transwell迁移实验步骤：所有细胞培养试剂和Transwellchamber放在37℃温育。待测细胞培养至对数生长期，消化细胞，用PBS和无血清培养基先后洗涤一次，用无血清培养基悬浮细胞，计数，调整浓度为2x105/ml。
